Методи за определяне на кръвна група


В съвременната медицина кръвна група характеризира набор от антигени, разположени на повърхността на еритроцитите, които определят тяхната специфичност..

Има огромен брой такива антигени (обикновено се използва таблица на кръвните групи с различни антигени), но определянето на кръвната група се извършва навсякъде, като се използва класификацията според Rh фактора и системата AB0.

Определянето на групата е задължителна процедура при подготовка за всяка операция. Такъв анализ е необходим и при постъпване на служба в някои контингенти, включително военните, служителите на вътрешните органи и правоприлагащите органи. Тази дейност се провежда поради повишения риск от животозастрашаващо състояние, за да се намали времето, необходимо за оказване на помощ под формата на кръвопреливане.

Кръвен състав на различни кръвни групи

Същността на системата AB0 е наличието на антигенни структури върху еритроцитите. Няма типични антитела (гама глобулини), съответстващи на тях в плазмата. Следователно за кръвни тестове можете да използвате реакцията "антиген + антитяло".

Еритроцитите се слепват, когато се срещнат антиген и антитяло. Тази реакция се нарича хемаглутинация. Реакцията се показва като малки люспи, когато се анализира. Изследването се основава на получаване на образ на аглутинация със серуми.

Антигените на еритроцитите "А" се свързват съответно с антитела ",", а също и "В" с "β".

Следните кръвни групи се отличават по състав:

  • I (0) - ά, β - повърхността на еритроцитите изобщо не съдържа антигени,
  • II (A) - β - на повърхността има антиген А и антитяло β,
  • III (B) - ά - повърхността съдържа B с антитяло от тип ά,
  • IV (AB) - 00 - повърхността съдържа и двата антигена, но няма антитела.

Определяне на кръвни групи

Ембрионът вече има антигени в състоянието на ембриона и аглутинините (антителата) се появяват през първия месец от живота.

Методи за определяне

Стандартен метод

Има много техники, но лабораторията рутинно използва стандартно определяне на серуми.

Стандартният серумен метод се използва за определяне на видовете AB0 антигени. Съставът на стандартния изохемаглутиниращ серум съдържа набор от антитела към еритроцитни молекули. В случай на наличие на антиген, който е податлив на действието на антитела, се образува комплекс антиген-антитяло, който започва каскада от имунни реакции.

Резултатът от тази реакция е аглутинацията на еритроцитите, въз основа на естеството на аглутинацията, която се случва, е възможно да се определи принадлежността на пробата към която и да е група.

За приготвянето на стандартен серум се използват донорска кръв и специфична система - чрез изолиране на плазмата, включително антитела, и след това я разреждане. Разреждането се извършва с използване на изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Развъждането се извършва по следния начин:

  • Добавете 1 милилитър плазма в епруветка, съдържаща 1 ml 0,9% разтвор на годна за консумация сол. Разбъркайте добре разтвора.
  • След това полученият плазмен разтвор се взема с пипета в обем от 1 милилитър. Добавете го в епруветка, която съдържа изотоничен разтвор. Така че е необходимо да се постигне плазмено разреждане със съотношение 1 към 256. Използването на други разреждания носи риск от диагностична грешка.

Самото изследване се извършва по този начин:

  • Капка от всеки серум (с общ обем около 0,1 милилитра) се поставя върху специална плака върху зоната, където има съответна маркировка (използват се 2 проби, едната от които е контролна, втората е предназначена за изследване).
  • След това до всяка капка серум се поставя тестова проба в обем от 0,01 милилитра, след което тя се смесва отделно с всяка диагностика.

Правила за декодиране на резултатите

След пет минути можете да оцените резултатите от теста. При големи капки серум настъпва просветление, при някои има реакция на аглутинация (образуват се малки люспи), при други не.

Видео: Определяне на кръвна група и Rh фактор

Ето опциите:

  • Ако няма реакция на аглутинация и в двете проби със серуми II и III (+ контрол 1 и IV) - определяне на първата група,
  • Ако се наблюдава съсирване във всички проби, с изключение на II - определяне на втората,
  • При липса на реакция на аглутинация само в проба от група III - определение III,
  • Ако се наблюдава коагулация във всички проби, включително IV-контрола - определение IV.

Когато серумите са в правилния ред и на табелката има подписи, навигацията е лесна: групата отговаря на места без аглутинация.

В някои случаи залепването не се вижда ясно. След това анализът трябва да бъде повторен, под микроскоп се наблюдава малка аглутинация.

Метод на кръстосана реакция

Същността на тази техника е определянето на аглутиногени с помощта на стандартни серуми или tsoliclones с паралелно определяне на аглутинини с помощта на стандартни еритроцити.

Техниката на анализ на напречното сечение практически не се различава от изследването с помощта на серуми, но има някои допълнения.

Добавете стандартни еритроцити капка по капка към плаката под серумите. След това от епруветката с кръвта на пациента, преминала през центрофугата, плазмата се екстрахира с пипета, която се поставя към стандартните еритроцити, разположени отдолу - добавя се към стандартния серум.

Както и според техниката на стандартния метод, резултатите от изследването се оценяват няколко минути след началото на реакцията. В случай на реакция на аглутинация може да се говори за наличие на аглутинини AB0, в случай на плазмена реакция може да се прецени за аглутиногените.

Резултати от кръвни тестове, използващи стандартни еритроцити и серуми:

Наличието на аглутинация при взаимодействие със стандартни изохемаглутиниращи серумиНаличието на аглутинация при реакция със стандартни еритроцитиКръвни групи
0 (I)A (II)Б (III)AB (IV)0 (I)A (II)Б (III)
-----++0 (I)
+-+---+A (II)
++---+-Б (III)
+++----AB (IV)

няма реакция.

Методът на пресичане е широко разпространен поради факта, че предотвратява диагностични грешки, възникващи при използване на стандартни техники.

Определяне на кръвна група с tsoliclones

Циклоните са синтетични заместители на суроватката, които съдържат изкуствени заместители на аглутинините от видове ά и β. Те се наричат ​​еритротести "Tsoliklon anti-A" (имат розов цвят), както и "anti-B" (имат син цвят). Очакваната аглутинация се наблюдава между аглутинините на tsoliclones и червените кръвни клетки..

Тази техника не изисква две серии, тя е по-надеждна и точна. Изследването и оценката на резултатите от него се извършват по същия начин, както при стандартния метод..

Тип ЗоликлонКръвна група
Резултат от аглутинацияАнти-ААнти-Б
--0 (I)
+-A (II)
-+Б (III)
++AB (IV)

Група IV (AB) задължително се потвърждава от аглутинация с tsoliclon "anti-AB", както и отсъствието на адхезия на еритроцитите в изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Експресен метод, като се използва набор от "Erythrotest-group карти"

Въпреки че общоприетите методи за определяне на принадлежността на кръвта към определена група са широко разпространени, в съвременната медицина се въвеждат бързи методи, най-разпространеният от които е "Еритротест".

При определяне на група с помощта на метода "Erythrotest group cards" се изисква набор от инструменти, включващи следните устройства:

  • Плоча с пет отвора за определяне на група чрез нейната Rh принадлежност и AB0 ​​система,
  • Скарификатор, предназначен да получи проба, необходима за изследване,
  • Стъклени пръчки за смесване на проби,
  • Почистете пипетата за събиране на разтвор.

Всички изброени инструменти са необходими за диагностика без грешки.

Комплектът за анализ на кръвта "Erythrotest-group cards" ви позволява да проучите Rh фактора и да определите кръвната група при всякакви условия, особено ефективен е при липса на възможност за използване на конвенционални методи.

В ямките на плочата има цоликлони към антигени (това са анти-А, -В, -АВ цоликлони) и към основния антиген, който причинява наследяването на Rh фактора (това е анти-D цоликлон). Петият отвор съдържа контролен реагент, който ви позволява да предотвратите възможни грешки и правилно да определите принадлежността към кръвна група.

MedGlav.com

Медицински справочник на болестите

Кръвни групи. Определяне на кръвна група и Rh фактор.

КРЪВНИ ГРУПИ.


Многобройни проучвания показват, че кръвта може да съдържа различни протеини (аглутиногени и аглутинини), чиято комбинация (наличие или отсъствие) образува четири кръвни групи.
Всяка група има символ: 0 (I), A (II), B (III), AB (IV).
Установено е, че може да се прелива само кръв от същата група. В изключителни случаи, когато няма едногрупна кръв и преливането е жизненоважно, е допустимо преливане на кръв от друга група. При тези условия кръв от група 0 (I) може да се прелива на пациенти с всяка кръвна група, а на пациенти с AB (IV) кръв може да се прелива с донорска кръв от всяка група.

Следователно, преди да се започне кръвопреливане, е необходимо точно да се установи кръвната група на пациента и прелитата кръвна група..

Определяне на кръвна група.


За определяне на кръвната група се използват стандартни серуми от групи 0 (I), A (II), B (III), които са специално подготвени в лабораториите на станции за кръвопреливане.
На бяла плоча на разстояние 3-4 см, отляво надясно, поставете цифрите I, II, III, обозначаващи стандартни серуми. Капка стандартна серумна 0 (I) група се нанася с пипета в сектора на плочата, обозначен с цифрата I; след това с втората пипета се прилага капка серумна група А (II) под номер II; вземете също серум В (III) от групата и с трета пипета нанесете под номер III.

След това субектът се убожда с пръст и течащата кръв се прехвърля със стъклена пръчка в капка серум на плочата и се разбърква до равномерно оцветяване. Във всеки серум се прехвърля нов стик. След 5 минути от момента на оцветяването (по час!), Кръвната група се определя от промяната в сместа. В серума, където се получава аглутинация (адхезия на еритроцитите), има ясно видими червени зърна и бучки; в серума, където не се наблюдава аглутинация, капката кръв ще остане хомогенна, равномерно оцветена в розово.

В зависимост от кръвната група на субекта в определени проби ще се получи аглутинация. Ако субектът има 0 (I) кръвна група, тогава слепването на еритроцитите с който и да е серум няма да се случи.
Ако субектът има A (II) кръвна група, тогава няма да има аглутинация само със серума от група A (II), а ако субектът има B (III) група, тогава няма да има аглутинация със серум B (III). Аглутинация се наблюдава при всички серуми, ако анализираната кръв е AB (IV) група.

Rh фактор.


Понякога дори при преливане на кръв от същата група се наблюдават тежки реакции. Проучванията показват, че приблизително 15% от хората нямат специален протеин в кръвта си, така наречения Rh фактор..

Ако на тези хора се направи втора трансфузия на кръв, съдържаща този фактор, тогава ще настъпи сериозно усложнение, наречено Rh-конфликт, и ще се развие шок. Следователно понастоящем всички пациенти трябва да определят Rh фактора, тъй като само Rh отрицателна кръв може да бъде прелята на реципиент с отрицателен Rh фактор..

Ускорен начин за определяне на Rh-принадлежност. Върху стъклена чаша на Петри се нанасят 5 капки анти-резус серум от същата група като тази на реципиента. Капка кръв от субекта се добавя към серума и се разбърква старателно. Чашата на Петри се поставя във водна баня при 42-45 ° C. Резултатите от реакцията се оценяват след 10 минути. Ако възникне кръвна аглутинация, тогава субектът има Rh-положителна кръв (Rh +); ако няма аглутинация, тогава изследваната кръв е Rh-отрицателна (Rh—).
Разработени са редица други методи за определяне на Rh фактора, по-специално, като се използва универсалният анти-Rh реагент D.

Задължително е да се определят кръвната група и Rh, принадлежащи на всички пациенти в болницата. Резултатите от изследването трябва да бъдат въведени в паспорта на пациента.

Определяне на Rh фактор и кръвна група

Понятието кръвна група

Кръвната група е специфичен набор от антигени и антитела

Кръвната група отразява наличието или отсъствието на определен набор от антигени и антитела. Антигените са разположени на повърхността на кръвните клетки - еритроцити, антителата присъстват в кръвната плазма.

Откриването на характерните черти на кръвта принадлежи на Карл Ландщайнер. Австрийски лекар от дълги години се опитва да установи причината за тежките усложнения при някои пациенти след кръвопреливане. Накрая той успя да разбере същността чрез експеримент: на примера на 6 кръвни проби ученият разкри физиологичната реакция на еритроцитите с различни кръвни серуми. Оказа се, че оформените елементи се залепват заедно с антитела от серумите на други хора и настъпва аглутинация. Натрупването се образува не поради самите еритроцити, а от разположените върху тях антигени.

Благодарение на Landsteiner, медицината започна да говори за кръвни групи

Антигенът се нарича аглутиноген, антителата към антигена - аглутинини. Според принципа на свързване на аглутиногените с определени аглутинини, Landsteiner идентифицира 3 кръвни групи. Един от тях се отличава с факта, че адхезията на еритроцитите не е настъпила при добавяне на серум, тоест в него няма антигени. За това тя получава обозначението 0 (нула), а останалите две от наличието на антигени А и В. Така през 1900 г. е основана системата на кръвните групи AB0. Няколко години по-късно учениците на Landsteiner идентифицират 4-та кръвна група, която, за разлика от предишните групи, има два антигена наведнъж - A и B.

Днес има 36 системи от кръвни групи, но в медицинската практика системата AB0 все още е най-широко разпространена и важна, както и резус фактор, който по-късно е открит и със съдействието на Landsteiner.

Какви кръвни групи съществуват според системата AB0

ABO кръвни групи

Системата AB0 има 4 кръвни групи:

  • 0 (I) - няма антигени;
  • А (II) - антиген А;
  • В (III) - антиген В;
  • AB (IV) - антигени A и B.

Антигенът е олигозахаридна верига, свързана с мембранни протеини и липиди на еритроцитите. Антигените А и В се различават един от друг само по различен краен остатък на олигозахарида.

Предшественикът на антигени А и В е антиген Н, който присъства във всички еритроцити. По наследство детето получава гени от бащата и майката, които кодират молекулярната структура на бъдещите антигени. Ген А кодира ензим, който образува антиген А от част от антигени Н, ген В насърчава образуването на антиген В с помощта на антиген Н. В 0 (I) кръвна група има ген Н и съответно антиген Н, но той няма с какво да се свързва, тъй като гените А и В отсъстват.

Кратки характеристики на четирите кръвни групи

Груповата несъвместимост води до „залепване“ на еритроцитите

Във всяка от групите освен антигени присъстват и антитела. Когато се комбинират различни кръвни групи, антителата започват да взаимодействат с антигените, слепвайки се, те унищожават еритроцитите, което води до сериозни последици, включително смърт. Всяка кръвна група се отличава с наличието на антитела към други групи, с изключение на АВ.

  • Група 0 се характеризира с антитела α и β, тоест собствениците на тази група не могат да вземат кръв нито A, B, нито AB.
  • Група А съдържа β аглутинини, което означава несъвместимост с група В и АВ, но е възможно да се вземе кръв от група 0.
  • Група В се различава по антитела α, не е съвместима с А и АВ групи, донори с група 0 са подходящи.
  • AB групата не може да има антитела към тези антигени, тъй като аглутиногените и аглутинините не могат да съществуват едновременно в един организъм, така че всички групи са подходящи за собствениците на AB.

По този начин група 0 може да бъде универсален донор, а групата AB може да бъде универсален реципиент. Но понастоящем те са изоставили практиката на преливане на различни групи, преливането се извършва от донори от същата кръвна група, за да се избегнат негативни последици..

Всяка от групите може да бъде подразделена на подгрупи, например, антиген А включва антигени А1, А2, А3 и др., Антиген В също съдържа различни варианти на подгрупи. Обикновено подгрупите могат да бъдат важни при определянето на кръвната група. Преди преливане, за да се избегне възможното влияние на вариацията на антигенните подгрупи, се провежда тест за индивидуална съвместимост.

Rh фактор: отрицателен и положителен

Кръвните групи могат да бъдат Rh отрицателни или Rh положителни

Заедно с AB0, системата от резус (Rh) е от голямо значение. Разликата в резус групите е разкрита през 40-те години на XX век, когато лекарите са изправени пред аглутинация на серума на пациента с 3⁄4 проби от червени кръвни клетки от донори, въпреки че при някои проби е имало пълно съвпадение на кръвните групи AB0. По-късно под ръководството на К. Ландщайнер д-р А. Винер открива и описва същата реакция, получена с кръвния серум на маймуна резус, от която името.

Rh е протеин от група антигени, открити на повърхността на еритроцитите. Сред различните антигени, съставляващи резус системата, първостепенно значение има антиген D. Следователно неговото присъствие определя положителния Rh (Rh +), липсата му означава, че кръвният фактор е отрицателен (Rh -).

Когато Rh-положителните кръвни клетки навлязат в кръвоносната система с Rh-отрицателни еритроцити, се образуват алоимунни антитела. Тялото възприема антигена D като чужд и се опитва да се отърве от него. Това явление се нарича Rh-конфликт. Откриването на Rh системата даде възможност да се избегнат негативните последици от преливането, а също така да се намери начин да се помогне на бременни жени, които имат Rh конфликт с плода в присъствието на различни Rh фактори..

Rh се наследява по рецесивно-доминиращ модел, където (Rh -) е рецесивен, а (Rh +) е доминиращ.

Определяне на кръвна група

Определяне на групова принадлежност по метода на аглутинацията

Кръвната група се открива с помощта на реакцията на аглутинация. Еритроцитите се комбинират с физиологичен разтвор на моноклонални антитела, всеки от които съдържа аглутинините α, β, α и β. Реакцията на залепване с определени антитела разкрива съответната група.

Елементи с форма на група А, комбинирани с аглутинини α.

Група В - адхезия настъпи в разтвор с антитела β.

Група AB - процесът на аглутинация не е наблюдаван с нито едно от антителата.

Група 0 - еритроцити, прилепнали към антителата на всеки разтвор.

Определяне на Rh фактора

Определяне на Rh-принадлежност на кръвта

За идентифициране на Rh-принадлежност се използват различни методи, най-често срещаните са тестовете, базирани на взаимодействието на еритроцитите с анти-резус серума в различни разтвори. Контролната проба обикновено е анти-резус серум от IV кръвна група, тоест не съдържа антиген D, антигени А и В. Ако се появи характерна реакция на аглутинация, Rh се определя като положителен.

Може ли изследването да покаже фалшив резултат?

Нарушаването на процедурната техника може да доведе до грешка в теста

Тестът може да отразява изкривен резултат в следните случаи:

  1. Нарушение на техниката на анализ:
    • Неправилна температура.
    • Неправилно съотношение на аглутинините и еритроцитите.
    • Недостатъчно време за наблюдение.
    • Грешка в реда на реагентите на плочата.
    • Нискокачествени реактиви.
  2. Трудни кръвни групи и Rh фактор.
    • Ако антигенът върху еритроцитите има ниска способност да аглутинира, например, антиген А е представен от подгрупа А2.
    • С неспецифична адхезия на оформени елементи, която може да бъде следствие от автоимунни патологии.
    • Кръвните химери допринасят за изкривяването на резултата. Това е състояние, когато червените кръвни клетки присъстват в няколко популации и антигените принадлежат към различни групи. Може да се случи поради масивни трансфузии от донори от група 0 (I) след трансплантация, но обикновено се наблюдава при хетерозиготни близнаци.
    • Различни заболявания засягат способността за аглутинация на еритроцитите.
    • Понякога при новородени аглутиногените са слаби, антителата липсват.

Може ли кръвната група да се промени??

Кръвната група е тема, която науката не покрива напълно

Преди имаше ясен отговор на този въпрос „не“. Ако е регистрирана друга група или фактор, резултатите се приписват само на лабораторна грешка. Днес, когато оборудването и реагентите са подобрени, вероятността от грешка става по-малка..

Учените се интересуват от този въпрос и започват да разработват теории, които променят идеята за диференциация на кръвта по групи. Един от тях стана широко разпространен: човешката раса първоначално представлява напълно различни видове, които преди това са живели поотделно, без да се смесват помежду си, всеки вид имаше свой собствен набор от гени.

Когато хората започнали да се движат географски и да създават двойки, кръвта на следващите поколения вече била смесена с метисов геном. Имунната система започва да произвежда антитела срещу непознати за нея антигени. Така са се образували кръвните групи. Тъй като съвременните хора всъщност са метиси, те имат всякакви комбинации от антигени, които под въздействието на различни фактори (инфекция, бременност) могат да се активират, което се проявява в резултат на промяна в кръвната група. Всъщност метисовият мултиген на гена на метиса просто проявява другите си „страни“, тоест първоначално съдържа различни антигени, които в един период от живота се проявяват от някои антигени, в друг от други..

Интересът към произхода на кръвните групи не изчезва. Наскоро 2 нови кръвни групи бяха идентифицирани от учени от Върмонт, смята се, че има поне още 10 групи, които все още не са разпознати.

Определяне на кръвна група

През 1901 г. видният учен Карл Ландщайнер открива кръвни групи и поставя основите на съвременната трансфузиология. Изследователят идентифицира три групи въз основа на различни варианти на реакцията на аглутинация на еритроцитите и кръвния серум. Материалът за изследването е взет от служители на нашата собствена лаборатория. Учениците на Ландщайнер Декастело и Стърли откриха четвърта група няколко години по-късно, но те я сметнаха за съмнителна и изключиха от резултатите от изследванията. През 1906 г. психиатър от Прага Ян Янски потвърждава съществуването на групата AB (IV). Публикуването на изследването в местно издание остана почти незабелязано. През 1910 г., след повторното откриване на четвъртата група от Мос, Ян Янски е принуден да докаже превъзходството на откритието. Чешки учен предложи цифрово обозначение на кръвни групи: I, II, III, IV.

В трансфузионната медицина кръвните групи са различни комбинации от еритроцитни антигени. Антигените са генетични черти: те се наследяват от родителите и остават непроменени през целия живот. През 1980 г. Международната общност за кръвопреливане разработи числена терминология за антигените на червените кръвни клетки. Разпределени 23 системи от кръвни групи, включително 194 антигена. Номерацията в повечето случаи съответства на реда на откриване. Антигените, включени във всяка от 23-те системи, са кодирани с шестцифрено число: първите три цифри са системният номер, а останалите три показват специфичността на антигена в системата.

№ на систематаИмеОбозначаванеИме на генитеХромозомна локализация
001AB0AB0AB09q34.1-q34.2
002MNSMNSGYPA, GYPB, GYPE4q28-q31
003PP1P122q11.2-qter
004RhRHRHD, RHCE1p36.2-p34
005ЛутеранскиLULU19q12-q13
006КелKELKEL7q33
007ЛуисLEFUT319p33
008ДъфиFYFY1q22-q23
009КидJKJK18q11-q12
010ДиегоDIAE117q12-q21
011YtYTАХЕ7q22
012XgXGXGXp22.32
013SciannaSCSC1p36.2-p22
014ДомброкНАПРАВЕТЕНАПРАВЕТЕнеизвестен
015КолтънCOAQP17p14
016Ландщайнер-ВинерLWLW19p13.2-цен
017Чидо / РоджърсCH / RGC4A, C4B6р21.3
018ХмЗ.FUT119q13
019KxXKXKXp21.1
020ГербичGEGYPC2q14-q21
021КромерCROMDAF1q32
022KnopsKNCR11q32
023ИндийскиINCD4411p13

AB0 система на кръвни групи

Групова принадлежност по системата AB0

АглутиногениАглутинини
0α и β
Aβ
Б.α
ABне
  • 0 (I): антигени А и В отсъстват, откриват се антитела α и β (35 - 40% от населението на света);
  • А (II): антиген А и антитела β присъстват (35%);
  • В (III): Намерени са аглутиноген В и аглутинин а (15 - 20%);
  • AB (IV): наличие на аглутиногени А и В, отсъствие на аглутинини α и β (5-10%).

Докато се движите от запад на изток от Евразия, степента на откриване на антиген А намалява и антиген В се увеличава. Антиген 0 е рядък в Азия, но е широко разпространен сред коренното население на Южна Америка, Полинезия и Австралия. Причината са епидемии от инфекциозни заболявания.

Резултатът от типизирането на кръв се записва в медицинската история или в донорската карта. Лекарят по трансфузия посочва датата и признаците.

В някои случаи по време на типирането се наблюдава лека аглутинация на еритроцитите. Недостатъчно изразената реакция се обяснява с наличието на слаби варианти на антигени А и В. Най-голямото клинично значение е представено от подгрупи А1 и А2. Слабите варианти са открити за първи път през 1911 г. от учените Дунгерн и Хиршелд. По-късно през 1930 г. Landsteiner и Levine предлагат имената на подгрупите - A1 и А2. A2 се среща до 20% в група А и до 35% в група АВ. Серум за лице от кръвни проби A2 може да съдържа анти-А1-антитела: в 2% от случаите в група А2 и 30% в А2Б. Анти-А антитела1 са опасни поради аглутинация на еритроцитите от група А.

Метод за определяне на кръвни групи А2 и А2Б.

Скорост на откриване на еритроцити A2 варира значително в зависимост от използваните реагенти. Ето сравнение на резултатите от изследването при използване на различни методи за определяне на кръвни групи А2 и А2Б..

  • Анти-А1 (лектин, фитохемаглутинин). Diagnosticum ясно (на +++ / ++++) аглутинации A1 еритроцити веднага след смесване с пробата. Не аглутинира A2 или причинява незначителна аглутинация на петата минута или по-късно.
  • Стандартни изохемаглутиниращи серуми.
  • Анти-А и анти-АВ циклони.
  • Цоликлон анти-А слаб.
Анализирани пробиКръвна група А (II)Кръвна група AB (IV)
Анализирани пробиГрупа А2 (II) в%Анализирани пробиГрупа А2B (IV) в%
Анти-А1 (лектин, фитохемаглутинин)159214.735723.5
Циклони: анти-А, анти-АВ35992.1 *3577.03 *
Цоликлон анти-А - слаб35874,5 *35711,2 *
Стандартни изохемаглутиниращи серуми159217.434434.2

Забележка: * - аглутинацията е слаба, има малки аглутинати на розов фон.

Най-високата точност на изследванията се осигурява от Anti-A1 (лектин, фитохемаглутинин). Тестът се препоръчва за откриване на антиген А подгрупи при деца под две години. Причината е физиологичната незрялост на еритроцитите на новородените, което води до грешни резултати от проучване със стандартни изохемаглутиниращи серуми.

През 1930 г. Landsteiner и Levine откриват подтипа Aint: междинен вариант между A1 и А2. Този антиген е характерен за негроидите и достига 8,5% при лица с кръвна група А. При белите хора Aint се наблюдава само при 1% от хората с втората кръвна група. В изключително редки случаи на човек липсват всички антигени от системата AB0. Бомбайският фенотип се дължи на hh генотипа. При липса на Н антиген, анти-А и анти-В антитела се откриват при лица от тази категория.

Метод за определяне на кръвни групи

Алгоритъм за определяне на кръвната група с хемаглутиниращи серуми

За да се определи кръвната група AB0 чрез директен метод, се използват две серии от стандартни изохемаглутиниращи серуми. Пригответе две партиди серуми от три групи с титър 1:32 или по-висок. Използвайте отделна етикетирана пипета, за да изтеглите всеки серум. Пригответе AB (IV) серум за контрол.

  1. Осигурете добро осветление и температура на въздуха 18 - 25 ° C.
  2. Маркирайте табелката: 0 (I) - ляво, A (II) - център, B (III) - дясно. В горната част в центъра посочете името на донора или номера на анализираната кръв.
  3. Нанесете 1 - 2 капки (приблизително 0,1 ml) серум върху ямките на два реда според етикета на плочата.
  4. Поставете една малка капка от еритроцитите за изследване до капките серум с пипета или стъклена пръчка. Обемът на серума трябва да бъде приблизително 10 пъти обемът на течността, съдържаща еритроцити.
  5. Разбъркайте капките в кладенците с пръчка.
  6. За да ускорите реакцията, разклатете леко таблетката.
  7. След три минути добавете една капка NaCl в ямките на плочата, в която е започнала аглутинацията. Изчакайте още две минути.
  8. След пет минути оценете резултатите от реакцията в преминаващия набор. В случай на лека аглутинация, добавете още една капка NaCl.
  • Отрицателната реакция в три ямки показва липсата на антигени върху еритроцитите на тестваната проба. Кръвта принадлежи към група 0 (I).
  • Аглутинацията в ямки със серум 0 (I) и B (III) показва наличието на аглутиноген А и принадлежащ към група А (II).
  • Началото на реакция със серуми 0 (I) и A (II) показва наличието на антиген В и група В (III).
  • Резултатите от реакцията във всички кладенци показват наличието на аглутиногени А и В и съответстват на четвъртата група АВ (IV).

В последния случай трябва да се уверите, че няма неспецифична реакция: нанесете 2-3 капки от съответната серумна група AB (IV) върху плаката и добавете една капка еритроцитите, които трябва да бъдат анализирани. Разбъркайте течностите и оценете резултата след пет минути. Липсата на аглутинация показва принадлежност към групата AB (IV), присъствието е признак на неспецифична реакция. В този случай, както и в случай на лека аглутинация, повторете проучването с други серии серуми.

Техника за определяне на кръвната група с tsoliclones

Моноклоналните антитела към еритроцитните антигени са заменили изохемаглутиниращите серуми. Една партида анти-А, анти-В, анти-АВ реагенти е достатъчна за всяко типизиране. Въвеждането на моноклонални реактиви значително опрости и стандартизира метода за определяне на кръвната група AB0. Ето кратко ръководство стъпка по стъпка за провеждане на изследвания на таблет.

  1. Осигурете добро осветление. Работете на стайна температура.
  2. Обект на изследване е среда, съдържаща еритроцити.
  3. Етикетирайте кладенци с плочи: анти-А, анти-В, анти-АВ или използвайте плоча с етикет с етикет.
  4. Разпределете приблизително 0,1 ml от подходящия моноклонален реагент във всяка от трите маркирани ямки.
  5. Добавете приблизително 0,03 ml анализирани еритроцити до всяка капка диагностикум.
  6. Смесете реактива с еритроцитите в ямките с отделни отделни стъклени пръчки.
  7. Разклатете таблетката за около три минути.
  8. Проверете за аглутинация в кладенците.

Обикновено реакцията се открива още в първите секунди след смесването. В същото време слабите варианти на антигени А и В могат да дадат по-късна аглутинация.

Определяне на кръвната група по непряк метод: алгоритъм на действията

Методът за определяне на кръвната група се основава на взаимодействието на еритроцитите от предварително типизирани индивиди от групи 0, A, B или смес от еритроцити от няколко донори от една група с изохемаглутинини α и β в изследвания серум.

Използвайте сухи, чисти пипети с всеки реактив за писане. Изплакнете бъркалките и пипетите в 0.9% разтвор на NaCl.

  • Пригответе чиния или чиния. Осигурете добро осветление в стаята.
  • Съберете 3 - 5 ml кръв без стабилизатор в епруветка. Оставете суроватката да престои 1,5 - 2 часа при стайна температура.
  • Измийте тестовите еритроцити в 0,9% физиологичен разтвор. Пригответе 5% каша.
  • Маркирайте разделите на таблета: 0 (I), A (II), B (III).
  • Поставете 2 капки (приблизително 0,1 ml) от анализираната плазма във всяка от трите ямки.
  • Добавете около 0,03 ml тестови червени кръвни клетки във всяка ямка.
  • С помощта на отделни пръчки смесете набраните червени кръвни клетки със серум.
  • Разклатете таблетката внимателно в продължение на 5 минути.
  • Извършете визуална оценка на резултатите от теста за аглутинация при пропусната светлина.

Заключение относно груповата принадлежност

Резултати от плазмата със стандартни еритроцитиГрупова принадлежност
0 (I)A (II)Б (III)
-++0 (I)
--+A (II)
-+-Б (III)
---AB (IV)

+ - наличие на аглутинация, - - отрицателен резултат от реакцията.

  • 0 (I): реакция в кладенци A (II), B (III) (открити антитела α и β).
  • A (II): аглутинация с еритроцити B (III) (открити β аглутинини).
  • B (III): аглутинация в дупка A (II) (α аглутинини се определят).
  • AB (IV): няма реакция във всички ямки (не са открити антитела в плазмата).

Резус система

Levine и Stetson откриха резус антигени през 1939 година. Учените са изследвали причините за развитието на хемолитични реакции при родилки по време на трансфузии на жени, идентични в системите AB0, MN и P. на еритроцитите от съпрузите. Година по-късно Landsteiner и Wiener произвеждат антитела чрез имунизиране на зайци с еритроцити от маймуни резус. Антителата се наричат ​​анти-RH антитела. Получените аглутинини влязоха в реакция на аглутинация с еритроцити на маймуни резус и с еритроцити на 85% от жителите на Ню Йорк от бялата раса. Антигенът, който е причинил образуването на антитела, се нарича RH-фактор (D-фактор).

В редки случаи човешките червени кръвни клетки не съдържат Rh антиген. Фенотипът е обозначен Rhнула. Гена Xro в този случай той се представя в хомозиготна форма и потиска производството на всички антигени. Rh фенотипнула не показват аглутиногенна активност, но имат способността да предават антигени по наследство.

Сред европейците честотата на Rh положителен за индивиди с D антиген е 85%. Мембраната на червените кръвни клетки обикновено съдържа около 10 000 - 30 000 молекули D. Има два специални типа D-положителни лица: D u (слаб) и D частичен (частичен). Имунната система D u и D частично е способна да произвежда анти-D антитела.

Слаб антиген се открива при 1,5% от Rh-позитивните индивиди и се характеризира с нисък брой (100-500) D молекули върху мембраната. Той е имуногенен за Rh отрицателни индивиди. В този случай преливането на D-положителни еритроцити при пациенти със слаб D може да причини сенсибилизация на кръвните клетки на донора. Еритроцитите с D u са слабо аглутинирани или изобщо не влизат в директна реакция на аглутинация с пълни анти-Rh антитела. Определянето на Rh-принадлежност се извършва при непряк антиглобулинов тест. Носителите D u се считат за Rh-положителни донори и Rh-отрицателни реципиенти.

Частично D има дефицит в един или повече епитопи на протеиновата молекула. Имунната система на хора с D частично е в състояние да произвежда антитела към липсващите епитопи. Сред носители на частичен антиген се различават седем групи лица. Най-голямото клинично значение е пренасянето на D VI (присъства само епитоп Z): собствениците на тази категория произвеждат антитела към непроменения антиген и към частичните антигени D I - D V, D VII. Техниката за определяне на Rh фактор D VI се състои в последователно използване на две диагностики: моноклонални IgM анти-D-антитела (tsoliklone Anti-D-Super или Anti-D IgM) и поликлонални или моноклонални IgG анти-D антитела (стандартен универсален реагент или tsoliklon Anti -Д). Отрицателният резултат от реакцията на първия и положителният резултат на втория етап от изследването показва откриването на D VI. Обикновено категория D VI съответства на генотипа CcDee. На бременни жени с D VI, когато носят плод с пълен D, се предписва антирезусен имуноглобулин.

Антителата срещу резус антигените са имунни. Възникват поради изосенсибилизация. Специфичността се определя от антигените, които провокират образуването на антитела. Изолирайте пълни и непълни антитела.

Пълни са IgM антитела. Те имат високо молекулно тегло и се откриват по-рядко от непълни антитела. Способен да аглутинира Rh-положителните еритроцити. По-малко важни са за кръвопреливането.

Непълните предимно принадлежат към класа IgG. Те са фиксирани на повърхността на Rh-положителни еритроцити, без да се образуват аглутинати. Свързването на кръвните клетки се извършва в присъствието на колоидни разтвори и протеолитични ензими или след третиране със серумен антиглобулин. Те имат по-ниско молекулно тегло в сравнение с пълните антитела. Може да премине през плацентата. По време на сенсибилизацията първо се произвеждат пълни антитела, след това в по-голяма степен се произвеждат непълни (IgG имуноглобулини) антитела.

Техника за определяне на Rh фактора с помощта на анти-D-Super tsoliklon

Tsoliklon Anti-D-Super е цялостно анти-D IgM човешко антитяло. За да се получат надеждни резултати, анализираната проба трябва да съдържа достатъчен брой червени кръвни клетки..

  1. Осигурете добро осветление и стайна температура в стаята.
  2. Поставете една голяма капка (приблизително 0,1 ml) Anti-D IgM върху чинията.
  3. Поставете една малка капка (приблизително 0,03 ml) от тестовите червени кръвни клетки наблизо.
  4. Смесете две капки със стерилна пръчка.
  5. След 10 - 15 секунди внимателно разклатете плочата за 20 - 30 секунди.
  6. Проверете за аглутинация три минути след смесването.

В случай на реакция кръвта се оценява като Rh-положителна (Rh +), при липса на реакция - като Rh-отрицателна (Rh-). В случай на отрицателна или слаба аглутинация е необходимо да се проведе повторно изследването с непълни анти-D IgG антитела, за да се идентифицира слаб или частичен антиген D.

Метод за определяне на Rh фактор D u при изпитване на епруветка

Паралелно с анализа се извършват три контролни проби: анти-D (анти-D IgG) tsoliklon реагент със стандартни Rh-положителни и Rh-отрицателни еритроцити, анализираните еритроцити с желатинов разтвор без анти-D IgG диагностикум.

  1. Поставете в епруветка 0,05 - 0,1 ml (една капка) еритроцити от съсирен кръвен съсирек или измити от консервант.
  2. Добавете 0,1 ml (две капки) 10% желатин, затоплен до втечняване при 45 - 50 ° C.
  3. Добавете една капка анти-D (анти-D IgG) цоликлон.
  4. Разбъркайте.
  5. Инкубирайте епруветката на водна баня за 10-15 минути или в инкубатор при 48 ° C за половин час.
  6. Добавете 5 - 6 ml изотоничен разтвор.
  7. Обърнете епруветката 1 - 2 пъти.
  8. Оценете наличието на аглутинация в пропусната светлина.

Липсата на резултати от реакцията с анти-D IgM и изразена аглутинация с анти-D IgG показват откриване на слаби форми на антиген D. В случай на лека аглутинация, изследването трябва да се повтори в индиректния тест на Кумбс.

Определяне на Rh-принадлежност със стандартен универсален реагент

Стандартен реагент антирезус Rh0D съдържа поликлонални непълни анти-D антитела. Паралелно с анализа на пробата се извършва контролно изследване на Rh реагента0D със стандартни Rh-положителни (единична група или група 0) и Rh-отрицателни (едногрупови) еритроцити.

  1. Поставете една капка Rh диагностикум на дъното на епруветката0д.
  2. Добавете една капка анализирани червени кръвни клетки.
  3. Разклатете епруветката няколко пъти.
  4. Наклонете тръбата почти хоризонтално и завъртете бавно за поне 3 минути. Разпространението на съдържанието по стените ще осигури по-изразен резултат от реакцията. Обикновено аглутинацията настъпва през първите 60 секунди. Необходимо е време за откриване на слаб антиген D u.
  5. Добавете 2 - 3 ml изотоничен разтвор на NaCl и обърнете епруветката 2-3 пъти, без да разклащате.
  6. Визуално преценете наличието на аглутинация. Изразените люспи на фона на бистър разтвор показват наличието на антиген D. Равномерно оцветената течност показва липсата на антиген.

Резултатът се счита за надежден само след проверка на контролните проби: началото на реакция със стандартни Rh-положителни и липса на реакция - с Rh-отрицателни еритроцити.

За информация относно поетапното формулиране на косвения тест на Кумбс, използващ непълни анти-D-антитела, вижте раздела "Реакция на Кумбс" на уебсайта.

Методи за определяне на кръвни групи, описание на таблицата

Почти всеки човек поне веднъж в живота си е преминал тест за установяване на кръвна група. Методите на този анализ и тяхната надеждност ще бъдат обсъдени по-нататък..

За какво служи диагнозата??

Кръвната група е специфична поредица от антигени, разположени на повърхността на червените кръвни клетки, които определят тяхната специфичност. Известни са много такива антигени, поради което е приета единна класификация на кръвта по ABO и Rh фактор..

Този показател задължително се определя при пациенти преди операция, военни, полицаи и други категории хора, които може да се нуждаят от спешно кръвопреливане.

Стандартен метод за типизиране на кръв

Най-често срещаният метод за изследване на този показател е методът, използващ стандартен серум. Тази диагноза определя често срещаните антигени от системата ABO.

Изохемаглутиниращият серум е комбинация от специални антитела към външните частици на еритроцитите. Ако се открие съвместим антиген, който може да бъде повлиян от антитела, се образува комплекс, който насърчава появата на имунозащитния механизъм. В резултат на това кръвните клетки на еритроцитите се слепват (аглутинация). Ако това се случи, тогава се прави заключението, че кръвта е несъвместима..

Тези серуми са направени от кръвта на донори по специална система, която предполага извличане на плазма, в която тя съдържа антитела, след което тя се разрежда с изотоничен натриев хлорид, което се извършва на няколко етапа:

  • 1 мл вода се излива в съда, в който се разтваря 0.9% обикновена сол.
  • Същото количество разредена плазма се добавя към същата епруветка..
  • След това 1 ml от тази течност се вкарва в съд с изотоник.

Процесът създава съотношение 1: 256. Ако методът на разреждане е нарушен, тогава има голяма вероятност да се получат грешни резултати..

Провеждане на изследвания

0,1 ml от всеки серум се нанася върху повърхността на плочата в областта, където се поставя желаната маркировка. След това се взема кръвна проба от 0,01 ml за всяка проба. И тогава всяка капка серум се смесва с кръв.

След пет минути се поставя диагноза. Тестването се счита за положително, ако реакцията на аглутинация е преминала. Въз основа на резултатите от анализите се изгражда таблица, в която те се въвеждат..

Таблица на резултатите от теста на кръвна група, използвайки стандартни серуми.

Техника на кръстосана реакция

В този случай за определяне на аглутиногена се използват tsoliclones. Иначе стандартни серуми с технология за паралелно изследване благодарение на еталонните еритроцитни клетки.

Тези два метода са много сходни помежду си. Но все пак има разлики.

Малка капка обикновени еритроцити се нанася върху повърхността, върху която предварително са поставени различни серуми. След това кръвта се разделя на фракции с помощта на центрофуга. И оформените елементи се добавят към стандартните серуми, а плазмената част се добавя към стандартните еритроцитни клетки. Оценката на резултатите се извършва след пет минути и показателите са отбелязани в таблицата.

Благодарение на тази техника грешките в изследването се елиминират..

Метод с използване на цоликлони

Ако не е възможно да се определи кръвната група със стандартни серуми, използвайте тази техника.

Tsoliklons - хибридни антитела, получени от В-лимфоцити в кръвта на мишки.

Последователността на диагностиката е следната:

  1. След маркиране върху плочата, които съответстват на вида цоликлон, разтворът се нанася.
  2. Към всяка проба tsoliclon се добавя една капка диагностицирана кръв.
  3. Оценка на резултатите за пет минути.
  4. За тази техника трябва да се спазват специални условия. Те включват пригодността на циклоните, нивата на стайна температура и влажност..

Резултатите от теста се считат за положителни, когато се наблюдава реакция на аглутинация, когато тези фракции се смесят. Ако това се е случило в две проби, тогава се счита, че кръвта принадлежи към четвъртата група. Ако реакцията изобщо не се наблюдава, тогава към първата. Диагностичните грешки в тази техника не са често срещани..

Бърз начин "Erythrotest"

Горните методи се използват от дълго време в медицината и са широко разпространени в целия свят. Но с оглед на факта, че индустрията непрекъснато се развива, се въвеждат бързи диагностични методи за установяване на принадлежност към кръвна група. Erythrotest се счита за такова нововъведение..

За да определите индикатора по този начин, трябва да имате следното оборудване:

  • Стандартна плоча с 5 ямки
  • Скарификатор за пункция и получаване на биологична течност
  • Стъклена пипета с гумена крушка
  • Пипета за аспирация на реагенти
  • Смесване на пръчки

Основното предимство на еритротеста е, че изследването не изисква допълнителни условия и е достъпно в момент, когато стандартната диагностика е невъзможна..
Последователност на извършване
Във вдлъбнатините на таблетката цоликлоните се поставят върху антигените от повърхностния тип и основният, който е отговорен за наследственото предаване на Rh фактора. Към последната ямка се добавя контролен серум, който ще изключи грешен резултат и правилно ще посочи принадлежността към една или друга група.

Оценката на резултатите от анализа се извършва с помощта на таблица, която показва възможните резултати от теста.

Класификация по ABO

Кръвна група, нейното определяне се извършва въз основа на специално разработени стандарти. Има конкретна таблица, която характеризира всяка кръвна група..


Следваща Статия
Хемангиом при деца